消毒與滅菌的方法

滅菌是用物理或化學(xué)的方法來殺死或除去物品上或環(huán)境中的所有微生物。消毒是用物理或化學(xué)的方法殺死物體上絕大部分微生物 ( 主要是病原微生物和有害微生物 ) 。消毒實(shí)際上是部分滅菌。

在微生物實(shí)驗(yàn)、生產(chǎn)和科研工作中，需要進(jìn)行純培養(yǎng)，不能有任何雜菌，因此，對所用器材、培養(yǎng)基要進(jìn)行嚴(yán)格滅菌，對工作場所進(jìn)行消毒，以保證工作順利進(jìn)行。

消毒與滅菌的方法很多，一般可分為加熱、過濾、照射和使用化學(xué)藥品等方法。

1 、加熱法

加熱法又分干熱滅菌和濕熱滅菌兩類。

1 ）干熱滅菌

有火焰燒灼滅菌和熱空氣滅菌兩種。火焰燒灼滅菌適用于接種環(huán)、接種針和金屬用具如鑷子等，無菌操作時的試管口和瓶口也在火焰上作短暫燒灼滅菌。通常所說的干熱滅菌是在電烘箱內(nèi)滅菌，此法適用于玻璃器皿如吸管和培養(yǎng)皿等的滅菌，在熱空氣 160 ℃ -170 ℃下保溫 2 小時進(jìn)行滅菌。

2 ）濕熱滅菌

⑴高壓蒸汽滅菌法 此法是將物品放在高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi) 1.05kg ／ cm 2 (15 磅 / 英寸 2 ) ， 121.3 ℃保持 15-30 分鐘進(jìn)行滅菌。時間的長短可根據(jù)滅菌物品種類和數(shù)量的不同而有所變化、以達(dá)到徹底滅菌為準(zhǔn)。這種滅菌適用于培養(yǎng)基、工作服、橡皮物品等的滅菌。

⑵間歇滅菌法 有少數(shù)培養(yǎng)基例如明膠培養(yǎng)基、牛乳培養(yǎng)基、含糖培養(yǎng)基等用干熱滅菌和高壓蒸汽滅菌均會受到破壞，則必須用間歇滅菌法。此法是用阿諾氏流動蒸汽滅菌器進(jìn)行滅菌。該器底層盛水，頂部插有溫度計(jì)，加熱后水蒸汽溫度達(dá)到 100 ℃時，即循環(huán)流于器內(nèi)，水蒸汽碰到器內(nèi)物體時，又凝成水，流至底層貯水處，故不至干涸。滅菌時，將培養(yǎng)基放在器內(nèi)，每天加熱 100 ℃ 30 分鐘、連續(xù)三天，第一天加熱后，其中的營養(yǎng)體被殺死，將培養(yǎng)基取出放室溫下 18-24 小時，使其中的芽孢發(fā)育成為營養(yǎng)體，第二日再加熱 l00 ℃ 30 分鐘，發(fā)育的營養(yǎng)體又被殺死，但可能仍留有芽孢，故再重復(fù)一次，使徹底滅菌。一般凡能用高壓蒸汽滅菌的物品均不采用此法滅菌。

⑶煮沸消毒法 注射器和解剖器械等可用煮沸消毒法。一般微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室中煮沸消毒時間為 10-15 分鐘，人用注射器和手術(shù)器械在有條件的地方，一般均采用高壓蒸汽滅菌法或干熱滅菌法滅菌。

2 、過濾滅菌

許多材料例如血清與糖溶液應(yīng)用一般加熱消毒滅菌方法，均會被熱破壞，因此，采用過濾除菌的方法。應(yīng)用最廣泛的過濾器有蔡氏 (Seitz) 過濾器和膜過濾器。蔡氏過濾器是用銀或鋁等金屬做成的，分為上、下兩節(jié)、過濾時，用螺旋把石棉板緊緊地夾在上、下兩節(jié)濾器之間，然后將溶液置于濾器中抽濾。每次過濾必須用一張新濾板。濾膜過濾器的結(jié)構(gòu)與蔡氏過濾器相似，只是濾膜是一種多孔纖維素 ( 乙酸纖維素或硝酸纖維素 ) ，孔徑一般為 0.45 m m ，過濾時，液體和小分子物質(zhì)通過，細(xì)菌被截留在濾膜上，但若要將病毒除掉，則需更小孔徑的濾膜。

3 、紫外線滅菌

紫外線波長在 200-300nm ，具有殺菌作用，其中以 265-266nm 殺菌力最強(qiáng)。無菌室或無菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。

4 、化學(xué)藥品滅菌

化學(xué)藥品消毒滅菌法是應(yīng)用能殺死微生物的化學(xué)制劑進(jìn)行消毒滅菌的方法。實(shí)驗(yàn)室桌面、用具以及洗手用的溶液均常用化學(xué)藥品進(jìn)行消毒滅菌。常用的有 2% 煤酚皂溶液 ( 來蘇爾 ) 、 0.25% 新潔爾滅、 1% 升汞、 3-5% 的甲醛溶液、 75% 酒精溶液等