單克隆抗體技術(shù)中人工誘導(dǎo)小鼠脾細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞融合后,細(xì)胞將以多種形式出現(xiàn),如脾細(xì)胞-瘤細(xì)胞、脾細(xì)胞-脾細(xì)胞、瘤細(xì)胞-瘤細(xì)胞、細(xì)胞多聚體、未融合的脾細(xì)胞和瘤細(xì)胞等,其中只有脾細(xì)胞-瘤細(xì)胞的融合體是有用的.

正常的脾細(xì)胞在培養(yǎng)基中存活僅5-7天,無需特別篩選,細(xì)胞多聚體也容易死去,關(guān)鍵問題是要去除未融合的瘤細(xì)胞.選擇培養(yǎng)基具有3種關(guān)鍵成分：次黃嘌呤（hypoxanthine）、氨甲蝶呤（aminopterin）和胸腺嘧啶核苷（thymidine）,故名HAT培養(yǎng)基.這個(gè)培養(yǎng)基通過抑制瘤細(xì)胞的核苷酸合成,達(dá)到去除未融合瘤細(xì)胞的目的.

細(xì)胞有兩條基本途徑合成嘌呤核苷酸,一條是從磷酸核糖、氨基酸、CO2和NH3等化合物開始,葉酸是重要的輔酶,而氨甲蝶呤是葉酸的拮抗劑,可阻斷瘤細(xì)胞通過這一途徑合成核苷酸.另一條途徑是利用已存在的堿基,經(jīng)特異的磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶催化合成核苷酸,如次黃嘌呤經(jīng)過次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶（HGPRT）轉(zhuǎn)變?yōu)猷堰屎塑账?融合所用的瘤細(xì)胞是選擇出來的HGPRT缺陷細(xì)胞株,因此不能在HAT培養(yǎng)基中生長,而且不合成或不分泌免疫球蛋白.只有融合細(xì)胞具有親代雙方的遺傳性能,可在HAT培養(yǎng)基中長期存活與繁殖并分泌抗體.