繼代培養(yǎng)可以與誘導(dǎo)培養(yǎng)基一樣
配制培養(yǎng)基有兩種方法可以選擇,一是購(gòu)買培養(yǎng)基中所有化學(xué)藥品,按照需要自己配制;二是購(gòu)買商品的混合好的培養(yǎng)基基本成分粉劑,如MS、B5等。
自己配制可以節(jié)約費(fèi)用,但浪費(fèi)時(shí)間、人力、且有時(shí)由于藥品的質(zhì)量問(wèn)題,給實(shí)驗(yàn)帶來(lái)麻煩。就目前國(guó)內(nèi)的情況看,大部分還是自己配制。為了方便起見(jiàn),現(xiàn)以MS培養(yǎng)基為例介紹配置培養(yǎng)基的主要過(guò)程。
1.配制幾種母液
1.配制MS大量元素母液
一般將大量元素分別配制成100倍的母液,使用時(shí)再分別稀釋100倍。
分別稱取
NH4NO3 165g KH2PO4 17g
KNO3 190g CaCl2·2H2O 44g
MgSO4·7H2O 37g
各自配成1L的母液。倒入1L試劑瓶中,存放于冰箱中。
2.配制MS微量元素母液
一般將微量元素配制成100倍母液。
依次稱取
KI 0.083g Na2MoO4·2H2O 0.025g
H3BO3 0.62g CuSO4·5H2O 0.0025g
MnSO4·H2O 1.69g CoCl2·6H2O 0.0025g
ZnSO4·7H2O 0.86g
配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放于冰箱中。
CuSO4·5H2O和CoCl2·6H2O 由于稱取量很小,如果天平精確度沒(méi)有達(dá)到萬(wàn)分之一,可先配成調(diào)整液。
分別稱取
CuSO4·5H2O 0.05g CoCl2·6H2O 0.05g
各自配成100ml的調(diào)整液,然后取5ml就還有0.0025g的量。
3.配制MS有機(jī)母液
一般配制成100倍MS有機(jī)母液。
依次稱取
肌醇 10g 鹽酸硫胺素(VB1) 0.01g
煙酸 0.05g 甘氨酸 0.2g
鹽酸吡哆醇(VB6) 0.05g
配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放于冰箱中。
4.配制MS鐵鹽母液
一般配制成100倍MS鐵鹽母液。
依次稱取
EDTA二鈉3.73g FeSO4·7H2O2.78g
配成1L母液,倒入1L試劑瓶中,存放于冰箱中。
所以MS母液有5種大量元素母液,加上MS微量元素母液、MS有機(jī)母液和MS鐵鹽母液,共8種母液。
激素母液的配制
各種生長(zhǎng)素和細(xì)胞分裂素要單獨(dú)配制,不能混合在一起,生長(zhǎng)素類一般要先用少量95%的酒精或1當(dāng)量的NaOH溶解,細(xì)胞分裂素一般要先用1當(dāng)量的鹽酸溶解,然后再加蒸餾水定容。一般取100mg配成100ml母液。