EC培養(yǎng)基配制

1）成份

胰蛋白胨或示胨 20.0g

乳糖 5.0g

膽鹽混合物或3號膽鹽 1.5g

磷酸氫二鉀（K2HPO4·3H2O） 4.0g

磷酸二氫鉀（KH2PO4） 1.5g

氯化鈉（NaCl） 5.0g

蒸餾水 1000mL

2）制法

將上述成份加熱溶解，分裝于內(nèi)裝倒管的試管中，同上滅菌后pH值應(yīng)為6.9。此培養(yǎng)基用前不宜置入冰箱，以防檢測時出現(xiàn)假陽性。

B.3.1.3 檢驗(yàn)步驟

a) 初發(fā)酵試驗(yàn)

1) 生物樣品在無菌操作條件下取全組織樣放入無菌玻璃研缽中研磨，研磨后用特殊加工的大口移液管無菌移取1.0克樣品至9.0毫升無菌海水的試管中，制備成10-1稀釋樣。 然后，用一系列裝有9.0毫升無菌海水的試管連續(xù)稀釋，制備成10-2、10-3、10-4稀釋樣。

2) 吸取上述10-1 、10-2、10-3稀釋樣，每個稀釋度各取1mL稀釋樣5份，分別加入5支盛有10mL已滅菌的普通濃度乳糖蛋白胨培養(yǎng)液的試管中（內(nèi)有倒管）。

3) 將上述15支試管充分混勻后，置于44℃恒溫箱中培養(yǎng)24h。

b) 復(fù)發(fā)酵試驗(yàn)

經(jīng)培養(yǎng)24h后，將產(chǎn)酸（培養(yǎng)液變成黃色）產(chǎn)氣（倒管上端積有氣泡）及只產(chǎn)酸的發(fā)酵管，用一無菌環(huán)（3mm直徑）或木壓舌板轉(zhuǎn)接入EC培養(yǎng)液中，搖勻后置44±0.5℃恒溫箱中培養(yǎng)24±2h。在此期間內(nèi)所得的產(chǎn)氣陽性管即證實(shí)有糞大腸菌群存在。

依據(jù)陽性管數(shù)查對照表B.1，即可得每g生物樣中糞大腸菌群的最近似值（MPN）。

若海生物樣污染較嚴(yán)重，接種后15管全部產(chǎn)酸產(chǎn)氣時，可將接種量減少為十分之一，即1mL的5管，0.1mL（1-9稀釋的1mL）5管，0.01mL（1+99稀釋的1mL）的5管。此時，由表B.1查得的每1/10g生物樣中的大腸菌群數(shù)。