1、培養(yǎng)基配選定
同種培養(yǎng)基配同著作某些差別除所用標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)嚴(yán)格按其規(guī)定進(jìn)行配制外般均應(yīng)盡量收集關(guān)資料加比較核再依據(jù)自使用目加選用記錄其源
2、培養(yǎng)基制備記錄
每制備培養(yǎng)基均應(yīng)記錄包括培養(yǎng)基名稱配及其源各種份牌號(hào)終pH值、消毒溫度間制備期制備者等記錄應(yīng)復(fù)制份原記錄保存?zhèn)洳閺?fù)制記錄隨制培養(yǎng)基同存放、防發(fā)混亂
3、培養(yǎng)基稱取
培養(yǎng)基各種必須精確稱取并要注意防止錯(cuò)亂完要斷配置于傍側(cè)每稱完種即配面軍做記號(hào)并所需稱取藥品取齊置于左側(cè)每種稱取完畢即移放于右側(cè)完全稱取完畢應(yīng)進(jìn)行檢查
4、培養(yǎng)基各份混合溶化
培養(yǎng)基所用化藥品均應(yīng)化純使用蒸煮鍋銅鍋或鐵鍋防微量銅或鐵混入培養(yǎng)基使細(xì)菌易使用銹鋼萵加熱溶化放入燒杯或燒瓶置高壓蒸汽滅菌器或流蒸汽消毒器蒸煮溶化鍋溶化、先用溫水加熱并隨擾、防焦化、發(fā)現(xiàn)焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即能使用應(yīng)重新制備待部固體溶化再用較火力使所完全溶化迄至煮沸瓊脂溶化用另部水溶化其兩溶液充混合加熱溶化程蒸發(fā)丟失水必須加補(bǔ)足
5、培養(yǎng)基pH初步調(diào)
培養(yǎng)基加熱消毒程、pH所變化培養(yǎng)基各完全溶解應(yīng)進(jìn)行PH初步調(diào)例牛肉浸液約降低pH0.2腸浸液pH卻顯著升高步驟操作者應(yīng)隨注意探索經(jīng)驗(yàn)、期能掌握培養(yǎng)基終PH保證培養(yǎng)基質(zhì)量PH調(diào)整應(yīng)培養(yǎng)基煮沸數(shù)鐘利培養(yǎng)基沉淀物析
6、培養(yǎng)基濾澄清
液體培養(yǎng)基必須絕澄清瓊脂培養(yǎng)基應(yīng)透明顯著沉淀 須要采用濾或其澄清達(dá)項(xiàng)要求般液體培養(yǎng)基用濾紙濾濾紙應(yīng)折疊折扇或漏斗形避免液壓均勻引起濾紙破裂
瓊脂培養(yǎng)基用清潔白色薄絨布趁熱濾亦用間夾薄層吸水棉雙層紗布濾新制肉、肝、血土豆等浸液、則須先用絨布碎渣濾再用濾紙反復(fù)濾濾能達(dá)澄清要求、則須用蛋清澄清即冷卻至55~60°C培養(yǎng)基放入三角燒瓶?jī)?nèi)裝入量超燒瓶容量1/2每1000ml培養(yǎng)基加入1~2雞蛋蛋白強(qiáng)力振搖3~5鐘置高壓蒸汽滅菌器、121°C加熱20鐘、取趁熱絨布濾即
7、培養(yǎng)基裝
培養(yǎng)基裝應(yīng)按使用目要求裝于試管、燒瓶等適容器內(nèi)裝量超容器裝盛量2/3容器口用墊防濕紙棉塞封堵其外須用防水紙包扎(現(xiàn)試管般用螺旋蓋者)裝能使用半自或電定量裝器裝瓊脂斜面培養(yǎng)基裝量應(yīng)能形2/3底層1/3斜面量洽裝容器應(yīng)預(yù)先清洗干凈并經(jīng)干烤消毒利于培養(yǎng)基徹底滅菌每批培養(yǎng)基應(yīng)另外裝20ml培養(yǎng)基于玻璃瓶隨該批培養(yǎng)基同滅菌測(cè)定該批培養(yǎng)基終pH用
8、培養(yǎng)基滅菌
般培養(yǎng)基采用121°C高壓蒸汽滅菌15鐘各種培養(yǎng)基制備特殊規(guī)定即用滅菌
某些畏熱糖類應(yīng)另行配20%或更高濃液濾或間歇滅菌消毒再用菌操作技術(shù)、定量加于培養(yǎng)基明膠培養(yǎng)基亦應(yīng)用較低溫度滅菌血液、體液抗素等則應(yīng)菌操作技術(shù)抽取加入于經(jīng)冷卻約50°C左右培養(yǎng)基
瓊脂斜面培養(yǎng)基應(yīng)滅菌立即取冷至55℃-60℃擺置適斜面待其自凝固
9、培養(yǎng)基質(zhì)量測(cè)試
每批培養(yǎng)基制備應(yīng)仔細(xì)檢查遍發(fā)現(xiàn)破裂、水浸入、色澤異、棉塞培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑棄并測(cè)定其終pH
全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)夜發(fā)現(xiàn)菌即棄
用關(guān)標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基培養(yǎng)24~48菌或應(yīng)追查原并重復(fù)接種結(jié)仍同前則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄能使用
10、培養(yǎng)基保存
培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處能放于普通冰箱內(nèi)放置間宜超周傾注平板培養(yǎng)基宜超3每批培養(yǎng)基均必須附該批培養(yǎng)基制備記錄副頁或明顯標(biāo)簽