你怎么知道培養(yǎng)基污染了？如果已經能看出來污染說明已經相當嚴重，這是的培養(yǎng)基營養(yǎng)狀況肯定已經跟不上了，滅菌后也不能提供培養(yǎng)時候的能力需求了吧

干嘛要2次滅菌呢！2次滅菌會導致培養(yǎng)基PH以及其他一些元素發(fā)生變化，從而整個培養(yǎng)基的成分都會不正常.而且2次滅菌也會導致培養(yǎng)基不凝固

配好的培養(yǎng)基應立即進行高壓濕熱滅菌，培養(yǎng)基不能進行二次滅菌。滅菌過的培養(yǎng)基放入冰箱2-10度冷藏保存 最長時間不能超過一月，最好是放置時間越短越好。融化瓊脂等培養(yǎng)基時最多加熱融化二次，第二次融化后未用完就應該舍去。